引言

朊病毒是一类可传播的病原体，能够引起人类和动物大脑中蛋白质的异常折叠，感染往往导致脑部损伤，且常常是致命的。此类神经退行性疾病的实例包括羊瘙痒症、疯牛病（牛海绵状脑病）和克雅氏病。过去，研究朊病毒通常需要长时间的生物测定，对感染动物进行长达1至6个月的观察，这一过程不仅耗时，而且饲养感染动物的成本也相当高。而现在，蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室开发了一种新的朊病毒接种测定法——实时震荡诱导转化测定法（RT-QuIC），可以对感染样本中朊病毒水平进行迅速而准确的终点定量。相比以往的方法，这种检测技术极大地提高了速度和通量，能够在短短20小时内完成检测，灵敏度可与全动物模型媲美，甚至更高。

检测原理

RT-QuIC检测法用于估算朊病毒接种的相对数量，通过测量样本的连续稀释，统计接种剂量（SD）。在此检测中，极少量的传染性朊病毒被添加到正常的朊病毒蛋白中，从而引发或导致朊病毒蛋白发生类似疾病的错误折叠。通过测量样本的系列稀释度并确定接种活性损失（SD50），即终点稀释度，来进行量化。

实验步骤

在整个20至68小时的实验过程中，仪器设置为在42°C下恒温孵育。我们开发了两个测试协议脚本：第一个协议设定为每隔一分钟进行一次震荡，然后静置一分钟；第二个协议则设定为每15分钟进行一次荧光终点测量。荧光染料硫黄素T（ThT）用作朊病毒接种的标记物，当ThT与朊病毒蛋白结合时，会引发荧光随时间增加。

仪器设置

荧光检测的底部读数设置为激励滤光片450纳米和排放滤光片480纳米，并使用闪光灯模式进行检测，震荡速度为700RPM。该实验采用斯皮尔曼-凯伯（Spearman-Kärber）分析法，类似于生物测定的50%致死剂量（LD50），用于估算每克组织中50%的孔对ThT反应阳性的播种剂量或稀释倍数（SD50/g）。

结果与讨论

应用软件脚本进行RT-QuIC的20至68小时测量，数据取自8个重复孔的相对荧光单位的平均值。实验结果显示，FLUOstarOmega酶标仪不仅具备线性振荡和轨道振荡功能，还可以进行独特的双轨道振荡，确保在高质量下持续进行数天的测量而不中断。数据持续收集并输出至BMGLABTECH的数据分析软件（MARS）和Excel中，形成了相应的RT-QuIC检测图表。

结论

多功能的酶标仪结合RT-QuIC检测法，实现了对朊病毒接种的更快速、高效测量。已有的实验结果表明，该方法不仅应用于仓鼠和绵羊的痒病、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病（CJD）和牛海绵状脑病（BSE），并且显示出比传统生物检测手段更快、更灵敏的优势。BMGLABTECH的Omega系列酶标仪坚固耐用，为这一检测提供了支持，能够承受连续多日的高速震动。

随着尊龙凯时-人生就是博品牌的不断发展，我们在生物医疗领域的创新将推动更高效的检测方法，使研究人员能够更快速、准确地监测朊病毒接种情况。欲了解有关RT-QuIC检测的更多信息，请关注相关研究和科学讲座。

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