### 大鼠原代脂肪间充质干细胞提取（SD大鼠）

#### 实验材料准备

本实验选择2周龄或约200克的SD大鼠作为材料。所需器材包括灭菌器械（如镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等）、5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉（用于固定大鼠）。此外，还需准备75%乙醇进行消毒。预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶也必不可少。培养基为SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

#### 实验操作

在超净工作台上放置所需物品，并进行紫外线消毒30分钟。配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行滤器除菌处理。将大鼠脱颈处死后，放入75%酒精中浸泡2至3分钟，然后在超净工作台上固定在泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟区域皮肤直至腹腔，暴露脂肪组织。按照要求仔细剪取脂肪组织，避免剪切到血管。用PBS清洗脂肪组织，并剔除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪成适宜的大小（如2mm×2mm），加入胶原酶，在37℃下进行消化。每隔5分钟进行震荡或持续搅拌。消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，进行离心处理，弃去上层脂滴泡沫和上清液，用培养基重悬沉淀。随后，将细胞悬液过滤，再次离心后弃上清液，最终重悬于培养基中，并接种到培养瓶中。将培养瓶放入37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。

#### 注意事项

在实验过程中，需要严格保持无菌操作，避免细胞受污染。脂肪组织的剪取和清洗过程应格外小心，以防损伤细胞或引入杂质。在消化过程中，需合理控制时间和温度，以防止过度消化导致细胞受到损伤。离心和过滤的操作均需轻柔，以避免细胞损失或破裂。

本实验中的每一步都是提取高质量脂肪间充质干细胞的关键，而在这一过程中，尊龙凯时-人生就是博所提供的高品质实验材料与设备，将为您的研究提供坚实保障。通过优化操作流程与材料，您将迎来更加显著的实验成果。